液相色譜儀是一種常用的色譜儀產(chǎn)品，主要由儲(chǔ)液器、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成，被廣泛用于多個(gè)領(lǐng)域中。
液相色譜儀檢測的對(duì)象是高沸點(diǎn)、難氣化的大分子化合物，其具有高效、快速、靈敏的特點(diǎn)，在生物醫(yī)藥研究、檢測方面有較多的應(yīng)用。然而，在使用液相色譜儀檢測生物醫(yī)藥上的樣品時(shí)，由于行業(yè)特性，樣品中的蛋白質(zhì)殘留，時(shí)常會(huì)對(duì)液相色譜柱造成污染。
工作原理：
分配系數(shù)與組分、流動(dòng)相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān)，也與溫度、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機(jī)制中，K有不同的概念：吸附色譜法為吸附系數(shù)，離子交換色譜法為選擇性系數(shù)?。ɑ蚍Q交換系數(shù)），凝膠色譜法為滲透參數(shù)。但一般情況可用分配系數(shù)來表示。
在檢測生物物質(zhì)如血漿或血清等積累在反相色譜柱上，必須采用不同與其他物質(zhì)的清洗方法。大部分情況下，純有機(jī)溶劑如乙晴或甲醇不溶解多肽和蛋白質(zhì)，因此不能有效地清洗柱子。反而，有機(jī)溶劑和緩沖液、酸、離子對(duì)試劑等的混合物則能有效地溶解。為確保液相色譜柱再生的效果，建議在使用溶劑沖洗色譜柱之前，了解色譜柱的填料類型以及確保使用的溶劑能與柱子的填料相容。硅膠基質(zhì)的柱子通常來說都是相容的，但有機(jī)聚合物基質(zhì)的柱子可能會(huì)在某些溶劑組合中膨脹或收縮，這樣會(huì)影響色譜柱的柱效。
在使用溶劑清洗反相色譜柱時(shí)，須對(duì)每個(gè)溶劑系統(tǒng)至少要沖洗20體積。由于有些溶劑系統(tǒng)黏性很大，沖洗的流速應(yīng)該相應(yīng)調(diào)整以確保不會(huì)超過泵壓。當(dāng)檢測的是尿液等樣品溶液時(shí)，至少應(yīng)該用40～50體積的HPLC級(jí)水來沖洗柱子。
液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動(dòng)相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
